① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：兔大隱靜脈平滑肌細胞

英文名稱：Rabbit Great Saphenous Vein Smooth Muscle Cells

組織來源：大隱靜脈

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

兔大隱靜脈平滑肌分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內(nèi)側(cè)端，經(jīng)內(nèi)踝前方，沿小腿內(nèi)側(cè)緣伴隱神經(jīng)上行，經(jīng)股骨內(nèi)側(cè)髁后方，進入大腿內(nèi)側(cè)部，與股內(nèi)側(cè)皮神經(jīng)伴行，逐漸向前上，在恥骨結(jié)節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點稱為隱股點。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、外靜脈、股內(nèi)側(cè)淺靜脈和股外側(cè)淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結(jié)扎時，須分別結(jié)扎、切斷各屬支，以防復(fù)發(fā)。大隱靜脈平滑肌細胞主要功能：①血管平滑肌細胞的生長潛力是原發(fā)血管病發(fā)的重要異常因素；②參與血管壁的炎癥反應(yīng)，并與血管疾病的進展和穩(wěn)定有關(guān)。因此，研究大隱靜脈平滑肌細胞的代謝和信號通路是研究大隱靜脈擴張等疾病的良好實驗材料。大隱靜脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。

實驗室分離的兔大隱靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔大隱靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔大隱靜脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細胞結(jié)合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

大鼠固酮合酶(ALDOS)檢測試劑盒 ，英文名： ALDOS ELISA Kit

Mouse vascular endothelial cell adhesion molecule 1 (VCAM-1/CD106) ELISA Kit 小鼠血管內(nèi)皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)檢測試劑盒

Rathemeoxygenase1,HO-1ELISAKit 大鼠血紅素氧合酶1(HO-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGSK(Mouseglycogensyhasekinase)ELISAKIT小鼠糖原合成酶激酶

細胞超氧化物陰離子化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒20次

RatTumornecrosisfactorβ,TNF-βELISAKit大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

shank1(SH3 and multiple anleyrin repead domins protein 1 0.5mgshank1(SH3 and multiple anleyrin repead domins protein 1) shank1多肽抗原

CD4重組人 CD4 / LEU3 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

CLEC7A Protein Human 重組人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 蛋白 (Fc 標簽)

IL6 Protein Human 重組人 IL6 / Interleukin-6 蛋白

shank1(SH3 and multiple anleyrin repead domins protein 1 0.5mgshank1(SH3 and multiple anleyrin repead domins protein 1) shank1多肽抗原

CLEC7A Protein Human 重組人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 蛋白 (Fc 標簽)

HA重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

IL6 Protein Human 重組人 IL6 / Interleukin-6 蛋白

CD4重組人 CD4 / LEU3 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

小鼠鼠總抗氧化能力( T-AOC)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human measles virus IgG (MV IgG) ELISA Kit 人麻疹病毒IgG(MV IgG)檢測試劑盒

HumanConnexin,CxELISAKit 人間隙連接蛋白(Cx)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

DuckIerleukin-8,IL-8檢測試劑盒鴨白介素8(IL-8/CXCL8)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

藻類高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

MouseCystatinC,Cys-CELISAKit小鼠半胱蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔大隱靜脈平滑肌細胞小鼠神經(jīng)絲蛋白檢測試劑盒   小鼠神經(jīng)絲蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠神經(jīng)絲蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠神經(jīng)絲蛋白試劑盒、小鼠神經(jīng)絲蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠神經(jīng)生長因子檢測試劑盒   小鼠神經(jīng)生長因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠神經(jīng)生長因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠神經(jīng)生長因子試劑盒、小鼠神經(jīng)生長因子檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白檢測試劑盒   小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白試劑盒、小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠上皮中性粒細胞活化肽檢測試劑盒   小鼠上皮中性粒細胞活化肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠上皮中性粒細胞活化肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠上皮中性粒細胞活化肽試劑盒、小鼠上皮中性粒細胞活化肽檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復(fù)蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用