細胞簡介：

小鼠小梁網分離自眼球組織；小梁網由角膜基質纖維、后界膜和角膜內皮向后擴展而成，覆蓋在鞏膜靜脈竇的內側。小梁網細胞在眼內壓調節中起著關鍵作用；小梁網細胞內有特定的神經遞質和神經肽受體，其中包括腎上腺素、乙酰和神經肽Y。青光眼是由于眼內壓力升高而造成的一種不可逆致盲眼病，小梁網細胞的體外培養是青光眼病因學研究的重要手段之一。在小梁網細胞中，一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發細胞內信號傳導機制，小梁網細胞可合成不同類型的細胞外基質蛋白以及金屬蛋白酶。形態學觀察可見，剛從組織塊長出的原代細胞，形態各異，多數呈星狀或不規則形。細胞有胞突，核橢圓形，胞體肥大，胞漿豐富，且可見吞噬顆粒。隨著細胞的增生及相互融合為單層，細胞的形態趨于一致。胞漿的色素顆粒及胞突消失，排列緊密呈類似上皮細胞的扁橢圓形或不規則形。胞體透亮，包膜清晰。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠小梁網采用組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠小梁網經NSE（神經元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

大鼠/離子轉運ATP酶α1肽(ATP1α1)檢測試劑盒 ，英文名： ATP1α1 ELISA Kit

Mouse niic oxide syhase (NOS) ELISA Kit 小鼠合成酶(NOS)檢測試劑盒

RatComplemefragme3a,C3aELISAKit 大鼠補體片斷3a(C3a)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforP(HumanGrowthHormoneBindingProtein)ELISAKit人生長激素結合蛋白

細胞鈣離子濃度比色法定量檢測試劑盒20次

RatsolubleIerleukin2recepter,IL-2sRELISAKit大鼠白介素2可溶性受體(IL-2sR)檢測試劑盒規格：96T/48T

EPHB4重組人 EphB4 / HTK 蛋白 (Fc 標簽) Protein

熱休克蛋白40(HSP40)重組蛋白 Recombinant Heat Shock Protein 40 (HSP40)

EVI2A重組人 EVI2A 蛋白 (Fc 標簽) Protein

DMBT1 Protein Human 重組人 DMBT1 / Muclin 蛋白

HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

熱休克蛋白40(HSP40)重組蛋白 Recombinant Heat Shock Protein 40 (HSP40)

DMBT1 Protein Human 重組人 DMBT1 / Muclin 蛋白

EPHB4重組人 EphB4 / HTK 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

EVI2A重組人 EVI2A 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠抗子宮內膜抗體(EMAb)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human sphingomyelin (SM) ELISA Kit 人鞘0脂(SM)檢測試劑盒

Humanmyelinprotein2,p2ELISAKit 人神經髓鞘蛋白(p2)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanalpha-granularmembraneprotein,GMP-140檢測試劑盒人血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測試劑盒規格：96T/48T

植物二(MDA)比色法定量檢測試劑盒50次

MonkeyN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit猴Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒規格：96T/48T

小鼠小梁網細胞小鼠核轉錄因子p65(mouse NF-kBp65)   作用：   ELISA   規格：      進口分裝

小鼠硝基酪酸(mouse Niotyrosine)   作用：   ELISA   規格：      進口分裝

小鼠神經肽Y(mouse NPY)   作用：   ELISA   規格：      進口分裝

小鼠神經生長因子(mouse NGF)   作用：   ELISA   規格：      進口分裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。