實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠微血管周分離自微血管組織；周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞，可以收縮。周細胞嵌入毛細血管內(nèi)皮細胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細胞進行細胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細胞的成熟過程。此外，周細胞還具有調(diào)控毛細血管血流量、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用，其多功能性是目前研究的熱點之一，所以對血管周細胞的生物學特征、標記物、細胞功能等的研究都為相關研究提供基礎資料。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細血管的血流量。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細血管直徑的雙向調(diào)控；毛細血管受損時，周細胞還可增殖，分化為內(nèi)皮細胞和成纖維細胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠血管周采用膠原酶-聯(lián)合消化法及不銹鋼網(wǎng)篩過濾法結合密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠微血管周經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠Agoi相關蛋白(AGRP)檢測試劑盒 ，英文名： AGRP ELISA Kit

Mouse osteopoin (OPN) ELISA Kit 小鼠骨橋素(OPN)檢測試劑盒

Mousenuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISAKit 小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumahrombopoietin,TPOELISAkit人血小板生成素

通用型羊弓形體剛地弓形蟲(Toxotest;Toxoplasmagondii)試劑盒20次

ELISAKitHSP47大鼠熱休克蛋白47

ERBB3重組恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

Nanog fragment 干細胞關鍵蛋白(多肽 0.5mgNanog fragment 干細胞關鍵蛋白(多肽)

CA4重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 Protein

DDR2 Protein Human 重組人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

CSNK2A1 Protein Mouse 重組小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白

Nanog fragment 干細胞關鍵蛋白(多肽 0.5mgNanog fragment 干細胞關鍵蛋白(多肽)

DDR2 Protein Human 重組人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

ERBB3重組恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

CSNK2A1 Protein Mouse 重組小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白

CA4重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 Protein

小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(sCD40L)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit 大鼠巨噬細胞癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)檢測試劑盒

Humanheparinsulphateprotoglycans,HSPGELISAKit 人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanalkalinephosphatase,ALP檢測試劑盒人堿性0酸酶(ALP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物V型氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Mouse5-Hydroxyyptamine,5HTELISAKit小鼠5羥色胺(5-HT)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠微血管周細胞小鼠環(huán)0酸鳥苷   英文名稱：   cyclic adenosine monophosphate   規(guī)格：      英文縮寫：   cGMP

小鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子   英文名稱：   ciliary neuroophic factor   規(guī)格：      英文縮寫：   CF

白細胞分化抗原14   英文名稱：   cluster of differeiation aigen 14   規(guī)格：      英文縮寫：   CD14

可溶性細胞表面分化抗原40配體   英文名稱：   Soluble Cluster of differeiation aigen 40 ligand   規(guī)格：      英文縮寫：   sCD40L