實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠腎上腺皮質(zhì)分離自腎上腺組織；腎上腺是人體相當(dāng)重要的內(nèi)分泌器官，由于位于兩側(cè)腎臟的上方，故名腎上腺。腎上腺左右各一，位于腎的上方，共同為腎筋膜和脂肪組織所包裹。左腎上腺呈半月形，右腎上腺為三角形。從側(cè)面觀察，腺體分腎上腺皮質(zhì)和腎上腺髓質(zhì)兩部分，周圍部分是皮質(zhì)，內(nèi)部是髓質(zhì)。腎上腺內(nèi)部是髓質(zhì)部分，分泌腎上腺素和。這些激素在應(yīng)激狀態(tài)釋放增多，能夠幫助升高血壓，加快心率，升高血糖，動員全身的儲備物質(zhì)，為機體與外界環(huán)境的抗?fàn)幾骱贸浞譁蕚洹ＤI上腺外部是皮質(zhì)部分，分泌醛固酮、和少量的雌雄激素。醛固酮能夠促進小便中尿鉀的排出和尿鈉的重吸收，正常數(shù)量的醛固酮，對維持人體正常血壓有重要作用。但是如果過多分泌，會導(dǎo)致高血壓和低血鉀。是人體必需的激素之一。當(dāng)人體處于應(yīng)激狀態(tài)時，比如感冒，發(fā)燒，遇到突發(fā)事件的時候，腎上腺皮質(zhì)分泌大量的，這些能夠動員機體的存儲能源，為應(yīng)對內(nèi)部或者外部重要事件提供充分的物質(zhì)準備。當(dāng)缺乏時，機體在遇到重大事件的時候，往往缺乏足夠應(yīng)對能力，容易被病毒或外界壓力所擊倒。腎上腺產(chǎn)生的雄激素，對男性來講，并非，但是對女性而言，是雄激素的一個重要來源。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠腎上腺皮質(zhì)采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠腎上腺皮質(zhì)經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠抑制素B(INH-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠促甲狀腺素釋放激素(H)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠促上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血清總補體(CH50)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat dopamine D2 receptor (D2R) ELISA Kit 大鼠多巴胺D2受體(D2R)試劑盒

Humanβmannosidase,βManaseELISAKit 人β甘露糖苷酶(βManase)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor(CTX-I)ELISAKit大鼠Ⅰ型膠原C端肽

熒光或共聚焦顯微鏡制片封片處理液(熒光穩(wěn)定、保存)5/20毫升

MouseIerleukin18,IL-18ELISAKit小鼠白介素18(IL-18)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CD38重組大鼠 SCARB3 蛋白 Protein

ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3 0.5mgErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3) 表皮生長因子受體3(抗原)

RSPO3重組人 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 標(biāo)簽) Protein

CD38 Protein Human 重組人 SCARB3 蛋白 (His & FLAG 標(biāo)簽)

CES2 Protein Mouse 重組小鼠 CES2 / Carboxylesterase-2 蛋白

ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3 0.5mgErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3) 表皮生長因子受體3(抗原)

CD38 Protein Human 重組人 SCARB3 蛋白 (His & FLAG 標(biāo)簽)

CD38重組大鼠 SCARB3 蛋白 Protein

CES2 Protein Mouse 重組小鼠 CES2 / Carboxylesterase-2 蛋白

RSPO3重組人 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 標(biāo)簽) Protein

小鼠腎上腺皮質(zhì)細胞大鼠法尼醇X受體(FXR)試劑盒 ，英文名： FXR ELISA Kit

Porcine endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit 豬內(nèi)皮素1(ET-1)試劑盒

鴨特定基因序列(Duck)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforM-AChRELISAKit大鼠受體

體液游離氨基酸含量熒光定量試劑盒20次

ELISAKitTGF-β1雞轉(zhuǎn)化生長因子β1