細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔陰道壁成纖維分離自陰道組織；陰道位于膀胱、尿道和直腸之間，是一個(gè)富有彈性的管狀器官。它在人類生殖過(guò)程中具有多種生理功能，是連接子宮與外陰的通道，是排出月經(jīng)血、娩出嬰兒的必經(jīng)之路，也是一個(gè)重要的性交器官。陰道壁按組織學(xué)由外到內(nèi)分三層，即黏膜層、肌層和外膜。1）黏膜層由上皮和固有膜組成。上皮較厚，為復(fù)層鱗狀上皮，從基底層到表層由基底層、旁基底層、中間層和表層組成。沒(méi)有角化層。陰道粘膜的基底層呈細(xì)波紋狀起伏。2）肌層由平滑肌組織構(gòu)成，肌束排列不規(guī)則，縱行和環(huán)形互相交錯(cuò)。肌束間有較多的結(jié)締組織和彈性纖維。陰道外口有環(huán)形的橫紋肌稱括約肌。3）外膜層為纖維膜，由結(jié)締組織構(gòu)成，內(nèi)含豐富的彈性纖維、靜脈叢、淋巴管和神經(jīng)。大鼠陰道壁成纖維細(xì)胞主要分離自外膜層，成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔陰道壁成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的tu陰道壁成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔陰道壁成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA 試劑盒

Human vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2)檢測(cè)試劑盒

HumanVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISAKit 人內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanEsadiol,E2檢測(cè)試劑盒人雌二醇(E2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織SPHK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

HumanorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISAKit人孤腓肽(OFQ/N)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

G-250快速無(wú)毒型蛋白質(zhì)染色試劑 100ml

Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein 0.5mgTsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein) Tsg101抗原

NCR3重組人 NCR3 / NKp300 蛋白 Protein

IL23 Protein Human 重組人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白

IL1RAP Protein Human 重組人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein 0.5mgTsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein) Tsg101抗原

IL23 Protein Human 重組人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白

G-250快速無(wú)毒型蛋白質(zhì)染色試劑 100ml

IL1RAP Protein Human 重組人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

NCR3重組人 NCR3 / NKp300 蛋白 Protein

豚鼠鉤端IgG(Lebtospira)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human iercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 人細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)檢測(cè)試劑盒

humanβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISAKit 人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCyclicguanosinemonophosphate,cGMP檢測(cè)試劑盒人環(huán)0酸鳥(niǎo)苷(cGMP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織FGFR3激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

Humanprimaryhepaticcarcinoma,PHCELISAKit人肝癌抗原(PHC)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔陰道壁成纖維細(xì)胞人樁蛋白檢測(cè)試劑盒   人樁蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人樁蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人樁蛋白試劑盒、人樁蛋白檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人乙脫氫酶檢測(cè)試劑盒   人乙脫氫酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人乙脫氫酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人乙脫氫酶試劑盒、人乙脫氫酶檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人血紅蛋白檢測(cè)試劑盒   人血紅蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人血紅蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人血紅蛋白試劑盒、人血紅蛋白檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人心肌錨蛋白重復(fù)域1檢測(cè)試劑盒   人心肌錨蛋白重復(fù)域1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人心肌錨蛋白重復(fù)域1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人心肌錨蛋白重復(fù)域1試劑盒、人心肌錨蛋白重復(fù)域1 檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。