實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔雪旺氏分離神經(jīng)組織；周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞稱施萬（schwann，又名雪旺細(xì)胞）細(xì)胞，它沿神經(jīng)元的突起分布。施萬細(xì)胞包裹在神經(jīng)纖維上，這種神經(jīng)纖維叫有髓神經(jīng)纖維。有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維的施萬細(xì)胞的形態(tài)和功能有所差異，施萬細(xì)胞的外表面有基膜，能分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，促進(jìn)受損的神經(jīng)元的存活及其軸突的再生，參與周圍神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)纖維的構(gòu)成。施萬細(xì)胞的胞核呈長(zhǎng)卵圓形，其長(zhǎng)軸與軸突平行，核周有少量胞質(zhì)。由于施萬細(xì)胞包在軸突的外面，故又稱神經(jīng)膜細(xì)胞（neurilemmalcell），它的外面包有一層基膜。施萬細(xì)胞外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱神經(jīng)膜（neurilemma），光鏡下可見此膜。在有髓神經(jīng)纖維發(fā)生中，伴隨軸突一起生長(zhǎng)的施萬細(xì)胞表面凹陷成一縱溝，軸突位于縱溝內(nèi)，溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜（mesaxon）。軸突系膜不斷伸長(zhǎng)并反復(fù)包卷軸突，把胞質(zhì)擠至細(xì)胞的內(nèi)、外邊緣及兩端（即靠近郎氏結(jié)處），從而形成許多同心圓的螺旋膜板層，即為髓鞘。故髓鞘乃成自施萬細(xì)胞的胞膜，屬施萬細(xì)胞的一部分。施萬細(xì)胞的胞質(zhì)除見于細(xì)胞的外、內(nèi)邊緣和兩端外，還見于髓鞘板層內(nèi)的施－蘭切跡。該切跡構(gòu)成螺旋形的胞質(zhì)通道，并與細(xì)胞外、內(nèi)邊緣的胞質(zhì)相通。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔雪旺氏采用-膠原酶混合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔雪旺氏經(jīng)S-100免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：雙極、多極形

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔雪旺氏體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠Ⅰ型膠原N末端肽(X)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： X ELISA Kit

Mouse activin A (Activin-A) ELISA Kit 小鼠活化素A(Activin-A)檢測(cè)試劑盒

MouseBH3ieractingdomaindeathagonist,BidELISAKit 小鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumansimilaoRIKENcDNA4933429F08geneELISAKit人類似RIKENcDNA4933429F08基因

通用型魚傳染性胰腺壞疽病(InfectiousPancreaticNecrosis;IPN)試劑盒20次

ELISAKitFIX大鼠IX

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PRRSV M protein 豬藍(lán)耳病病毒M蛋白 0.5mgPRRSV M protein 豬藍(lán)耳病病毒M蛋白

MESDC2重組人 MESDC2 / MESD 蛋白 Protein

IDI2 Protein Human 重組人 IDI2 蛋白

EPHB2 Protein Human 重組人 EphB2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

PRRSV M protein 豬藍(lán)耳病病毒M蛋白 0.5mgPRRSV M protein 豬藍(lán)耳病病毒M蛋白

IDI2 Protein Human 重組人 IDI2 蛋白

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

EPHB2 Protein Human 重組人 EphB2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

MESDC2重組人 MESDC2 / MESD 蛋白 Protein

小鼠8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat cytochrome C (Cyt-C) ELISA Kit 大鼠(Cyt-C)檢測(cè)試劑盒

HumanEsadiolreceptor,ERELISAKit 人雌二醇受體(ER)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumancomplemefactorD,CFD檢測(cè)試劑盒人補(bǔ)體因子D(CFD)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織BTK激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

HumanPseudomonasExotoxinA,PEAELISAKit人綠膿桿菌外毒素A(PEA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔雪旺氏細(xì)胞兔II型前膠原C端肽(rabbit PIICP)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔可溶性破骨細(xì)胞異化因子(rabbit RANKL)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔素(rabbit Renin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔S100b   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝