產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Human Sonic Hedgehog Protein

產(chǎn)品中文名稱：重組人音猬因子（Shh）

規(guī)格：20 μg/100 μg/1 mg

貨號：EY-01X8654
用途：僅供科研研究實驗

特點&優(yōu)勢:

標(biāo)簽:無標(biāo)簽

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來源于：人源SHH (Q15465.1) (Gly25-Gly197)表達(dá)的蛋白片段。

蛋白長度：重組人SHH由176個氨基酸組成，在N端有His標(biāo)簽，預(yù)測分子量為23.48 kDa。

純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測

采用 LAL 法檢測，每 1 μg 蛋白質(zhì)中的 EU 含量小于 1.0。

產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的 PBS，pH 7.5。

基因ID:6469

使用中注意事項:開蓋使用前，請先離心。本產(chǎn)品為凍干粉，推薦用動?動

背景

Sonic Hedgehog Homolog (SHH)屬于一個名為Hedgehog的三蛋白家族。另外兩個家族成員是印度刺猬(IHH)和沙漠刺猬(DHH)。刺猬蛋白是胚胎發(fā)育過程中的關(guān)鍵信號分子。SHH在各種胚胎組織中表達(dá)，并在調(diào)節(jié)許多系統(tǒng)的模式中發(fā)揮關(guān)鍵作用，例如四肢和大腦。SHH在成體干細(xì)胞的分裂以及某些癌癥和其他疾病的發(fā)展中也起著重要作用。

本產(chǎn)品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1 0.5mgB7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) 程序性死亡配體1(多肽)

IGFBP6 Protein Human 重組人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白

CEACAM1重組小鼠 CEACAM1 / CD66a 蛋白 Protein

F3 Protein Rat 重組大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白

CSF1R重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (aa 543-922, His & GST 標(biāo)簽) Protein

豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human aconitase 2 (ACO-2) ELISA Kit 人烏頭酸酶2(ACO-2)檢測試劑盒

HumanNoradrenalineBitaas,NE-BELISAKit 人重去甲(NE-B)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumancrosslinkedN-telopeptideoftypeⅠcollagen,X檢測試劑盒人Ⅰ型膠原N末端肽(X)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒20次

HumanProstaglandinF2α，PGF2αELISAKit人前列腺素F2α(PGF2α)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

四甲基化銨   100g

TMA   500g

四甲基胺   5g

TMB   1g

大鼠跨膜蛋白27(TMEM27)檢測試劑盒 ，英文名： TMEM27 ELISA Kit

Monkey macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit巨噬細(xì)胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)檢測試劑盒

Ratdopamine,DAELISAKit 大鼠多巴胺(DA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFT4游離T4

細(xì)胞花生四烯酸(arachidonicacid)酶反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒20次

Ratplatelet-derivedgrowthfactor-BB,PDGF-BBELISAKit大鼠血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組人音猬因子（Shh）CEACAM1重組小鼠 CEACAM1 / CD66a 蛋白 Protein

B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1 0.5mgB7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) 程序性死亡配體1(多肽)

CSF1R重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (aa 543-922, His & GST 標(biāo)簽) Protein

IGFBP6 Protein Human 重組人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白

F3 Protein Rat 重組大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。