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      產(chǎn)品名稱:NRK-49F細胞,大鼠腎成纖微細胞說明書

      產(chǎn)品特點:NRK-49F細胞,大鼠腎成纖微細胞說明書上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品:彩虹180廣譜蛋白Marker(11-180KD)20T 100ul 支

      Itraconazole 5g 瓶

      豬血清 100ml 瓶

      Cytosine 胞嘧啶 5g 瓶

      熒光抗體稀釋液 100ml 瓶

      Oxysophocarpine 氧化槐果堿 26904-64-3 20mg

      細胞過濾篩(不銹鋼) 60

      產(chǎn)品型號:

      更新日期:2021-03-29

      訪問次數(shù):694

      NRK-49F細胞,大鼠腎成纖微細胞說明書的詳細資料:

      實驗報告:
      一、分離與培養(yǎng)
      1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
      2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
      3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
       4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
       5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
      二、免疫熒光鑒定:
      1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
       2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
      3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
       4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
      5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
      6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

      ?

      運輸和保存:
      視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
      1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復(fù)蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
      2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

      產(chǎn)品名稱

      NRK-49F細胞,大鼠腎成纖微細胞說明書

      英文名稱

      NRK-49F cells, rat kidney into fiber cells

      貨號

      EY-X64139

      細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
      1.研究的對象是活細胞
      在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
      2.研究條件可以人為控制
      pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
      3.研究的樣本可以達到比較均一性
      通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
      4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
      采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
      冷凍保存細胞之方法?
      冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
      冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
      培養(yǎng)操作:
      1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
      2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。      
      1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
      2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
      3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
      4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
      3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
      1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
      2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
      3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

      革蘭氏染色液試劑盒 4×10ml  盒

      Aprotinin 蛋白酶抑制劑() 5mg  瓶

      Shikimic acid 莽草酸 138-59-0  20mg

      羊抗人C3-HRP 0.1ml  支

      9-Aminocamptothecin 9-氨基 91421-43-1  20mg

      彩虹180廣譜蛋白Marker(11-180KD)20T 100ul  支

      Itraconazole 5g  瓶

      豬血清 100ml  瓶

      Cytosine 胞嘧啶 5g  瓶

      熒光抗體稀釋液 100ml  瓶

      Oxysophocarpine 氧化槐果堿 26904-64-3  20mg

      細胞過濾篩(不銹鋼) 60目  個

      NRK-49F細胞,大鼠腎成纖微細胞說明書C-藻藍素(藻藍蛋白)c-phycocyanin(C-PC) 0.5mg

      結(jié)締組織生長因子(多肽抗原)CTGF (connective tissue growth factor) 0.5mg

      周期素E/原癌基因抗原Cyclin E 0.5mg

      DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3α(抗原)Dnmt3a(cytosine-5)-methyltransferase 3A) 0.5mg

      周期素 C(抗原)Cyclin C 0.5mg

      細胞色素P450單氧化酶(多肽抗原)CYP450(Cytochrome P450 monooxygenase) 0.5mg

      降鈣素基因相關(guān)肽CGRP (calcitonin gene related peptide, CGRP) 0.5mg

      脫羧酶蛋白體36 cxorf36抗原CXorf36(uncharacterized protein Cxorf36 precursor) 0.5mg

      (DTX1) (Deltex protein 1)抗原Deltex-1 0.5mg

      DISC1 N端抗原DISC1(disrupted in schizophrenia1)(NT) 0.5mg

      DISC1 C端抗原DISC1(disrupted in schizophrenia1)(CT) 0.5mg

       

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