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      產(chǎn)品名稱:假單胞菌屬通用LAMP試劑盒

      產(chǎn)品特點(diǎn):4-甲酰-1-十六烷氯吡鎓:383.024- carbamoyl -1- sixteen alkyl pyridinium chloride:377085-58-0 C22H39ClN2O

      4--1,2,3-三氮唑:145.1641,2,3 -三氮唑:1680-44-0 C8H7N3

      過錸酸鉀:289.3Potassium perr

      產(chǎn)品型號(hào):50次

      更新日期:2021-02-26

      訪問次數(shù):520

      50次假單胞菌屬通用LAMP試劑盒的詳細(xì)資料:

      使用方法:
      一、樣品 DNA 的制備
      用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
      二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
      1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
      2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
      3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
      4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
      5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
      6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
      7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
      8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

      參數(shù)規(guī)格:

      產(chǎn)品名稱

      假單胞菌屬通用LAMP試劑盒

      英文名稱

       Universal lamp kit for Pseudomonas

      規(guī)格

      50次

      儲(chǔ)存條件:
      僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
      1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
      2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
      3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
      4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
      5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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      檢測(cè)步驟:
      一、 試劑的準(zhǔn)備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
      試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
      熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
      7.2 qPCR反應(yīng)條件
      將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
      循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

      甲紫Methyl violet:407.99 C25H30ClN3:8004-87-3

      性紅9Acid red 9:400.38 C20H13N2NaO4S:8003-59-6

      3-氟-4-吡:125.13- -4- pyridine formaldehyde:40273-47-0 C6H4FNO

      3-甲酸:129.163- piperidine formic acid:498-95-3 C6H11NO2

      2,3,5-三氯-4-吡:210.452,3,5- three -4- pyridine formaldehyde:251997-31-6 C6H2Cl3NO

      4-甲酰-1-十六烷氯吡鎓:383.024- carbamoyl -1- sixteen alkyl pyridinium chloride:377085-58-0 C22H39ClN2O

      4--1,2,3-三氮唑:145.1641,2,3 -三氮唑:1680-44-0 C8H7N3

      過錸酸鉀:289.3Potassium perrhenate:10466-65-6 KO4Re

      2,3-二甲溴:185.06Two - methyl 2,3-:576-23-8 C8H9Br

      假單胞菌屬通用LAMP試劑盒 LRRN3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

      小鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

      食蟹猴 CD32b / FCGR2B 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

      小鼠 EGF 基因全長(zhǎng)ORF克隆

      CREBZF 基因全長(zhǎng)ORF克隆

      PEX11B 基因全長(zhǎng)ORF克隆

      TPPP3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

      ALG14 基因全長(zhǎng)ORF克隆

      GFRA3 / GFR-alpha-3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

      小鼠 PTPLAD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

      小鼠 F9 / FIX 基因全長(zhǎng)ORF克隆

      食蟹猴 CXCR4 基因全長(zhǎng)ORF克隆

       

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