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      產(chǎn)品名稱:CW-2細(xì)胞,結(jié)腸腺癌細(xì)胞說明書

      產(chǎn)品特點(diǎn):CW-2細(xì)胞,結(jié)腸腺癌細(xì)胞說明書上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品:黑酚葡萄糖苷(97%) CAS 規(guī)格:20mg 訂購|咨詢

      CAS 71125-38-7 規(guī)格:100mg 訂購|咨詢

      苷;Kaempferitrin CAS 482-38-2 規(guī)格:20mg 訂購|咨詢

      SN-38 CAS 119577-28-5 規(guī)格:20mg 訂購|咨詢

      黃荊子 CAS 規(guī)格:1g 訂購|咨詢

      產(chǎn)品型號:

      更新日期:2021-03-12

      訪問次數(shù):595

      CW-2細(xì)胞,結(jié)腸腺癌細(xì)胞說明書的詳細(xì)資料:

      實(shí)驗(yàn)報告:
      一、分離與培養(yǎng)
      1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
      2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
      3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
       4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
       5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
      二、免疫熒光鑒定:
      1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
       2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
      3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
       4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
      5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
      6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

      ?

      運(yùn)輸和保存:
      視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
      1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
      2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

      產(chǎn)品名稱

      CW-2細(xì)胞,結(jié)腸腺癌細(xì)胞說明書

      英文名稱

      CW-2 cells, colon cancer cells

      貨號

      EY-X63223

      細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
      1.研究的對象是活細(xì)胞
      在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
      2.研究條件可以人為控制
      pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
      3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
      通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
      4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
      采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
      冷凍保存細(xì)胞之方法?
      冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
      冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
      培養(yǎng)操作:
      1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
      2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
      1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
      2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
      3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
      4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
      3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
      1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
      2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
      3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

      g薟精醇;Darutigel CAS 5940-00-1 規(guī)格:20mg 訂購|咨詢

      大黃素 CAS 518-82-1 規(guī)格:HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

      苔黑酚葡萄糖苷(97%) CAS  規(guī)格:20mg 訂購|咨詢

      CAS 71125-38-7 規(guī)格:100mg 訂購|咨詢

      ;Kaempferitrin CAS 482-38-2 規(guī)格:20mg 訂購|咨詢

      SN-38 CAS 119577-28-5 規(guī)格:20mg 訂購|咨詢

      黃荊子 CAS  規(guī)格:1g 訂購|咨詢

      丁胺醇 CAS  規(guī)格:100mg 訂購|咨詢

      ;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 5836-29-3 規(guī)格:0.1g 訂購|咨詢

      次大風(fēng)子素 CAS 51419-48-8 規(guī)格:HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

      蜘蛛香 CAS  規(guī)格:1g 訂購|咨詢

      CW-2細(xì)胞,結(jié)腸腺癌細(xì)胞說明書蛋白激酶B3抗體 英文名稱:Ephrin B3 0.2ml

      磷酸化蛋白激酶受體B1+B2抗體 英文名稱:phospho-EphB1+EphB2 (Tyr594) 0.1ml

      蛋白激酶受體B1+B2+B3+B4抗體 英文名稱:EphB1+EphB2+EphB3+EphB4 0.2ml

      空通氣孔樣蛋白2抗體 英文名稱:EMX2 0.2ml

      同源盒蛋白轉(zhuǎn)錄因子EN2抗體 英文名稱:EN2 0.1ml

      CD39樣蛋白1抗體 英文名稱:ENTPD2 0.2ml

      磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶5抗體 英文名稱:phospho-ERK5 (Thr218 + Tyr220) 0.1ml

      真核翻譯起始因子5抗體 英文名稱:EIF5 0.2ml

      早期B淋巴細(xì)胞因子2抗體 英文名稱:EBF2 0.2ml

      ELAVL2蛋白抗體 英文名稱:ELAVL2 0.2ml

      ELAVL2+ELAVL4蛋白抗體 英文名稱:ELAVL2 + ELAVL4 0.2ml

       

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