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      產(chǎn)品名稱:牛鼻炎病毒通用RT-LAMP試劑盒

      產(chǎn)品特點(diǎn):牛鼻炎病毒通用RT-LAMP試劑盒上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品:蛋白激酶A錨定蛋白95抗體 英文名稱:AKAP95 0.1ml

      頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體 英文名稱:ASBT 0.1ml

      去整合素樣金屬蛋白酶8抗體 英文名稱:ADAM8 0.2ml

      芳香脫乙酰基酶樣蛋白3抗體 英文名稱:AADACL3

      產(chǎn)品型號(hào):50次

      更新日期:2021-03-05

      訪問次數(shù):486

      50次牛鼻炎病毒通用RT-LAMP試劑盒的詳細(xì)資料:

      使用方法:
      一、樣品 DNA 的制備
      用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
      二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對(duì)照。
      1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
      2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
      3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
      4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
      5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
      6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
      7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照。
      8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

      參數(shù)規(guī)格:

      產(chǎn)品名稱

      牛鼻炎病毒通用RT-LAMP試劑盒

      英文名稱

       Universal RT-LAMP kit for bovine rhinitis virus

      規(guī)格

      50次

      儲(chǔ)存條件:
      僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
      1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
      2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
      3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
      4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
      5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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      檢測(cè)步驟:
      一、 試劑的準(zhǔn)備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
      試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
      熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
      7.2 qPCR反應(yīng)條件
      將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
      循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

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      牛鼻炎病毒通用RT-LAMP試劑盒蛋白激酶A錨定蛋白95抗體 英文名稱:AKAP95 0.1ml

      頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體 英文名稱:ASBT 0.1ml

      去整合素樣金屬蛋白酶8抗體 英文名稱:ADAM8 0.2ml

      芳香脫乙酰基酶樣蛋白3抗體 英文名稱:AADACL3 0.2ml

      ACN9蛋白抗體 英文名稱:ACN9 0.2ml

      腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體 英文名稱:AMPK alpha 2 0.1ml

      雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體(N端) 英文名稱:ADAR1 (N-terminus) 0.2ml

      腺苷酸激酶抗體 英文名稱:ADK 0.1ml

      α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1 英文名稱:A2ML1 0.1ml

      細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白3抗體 英文名稱:42097 0.1ml

      肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體 英文名稱:Actin 0.1ml

       

       

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