使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

參數(shù)規(guī)格：

儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
?
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

羥基酪醇;3,4-Dihydroxyph 10597-60-1 50mg 訂購(gòu)|咨詢

去甲堿;Higenamine 5843-65-2 20mg 訂購(gòu)|咨詢

芹菜苷;Apiin 26544-34-3 20mg 訂購(gòu)|咨詢

1-羥基-2,3,4,7-四甲氧基山山酮 14103-09-4 10mg 訂購(gòu)|咨詢

去甲基川陳皮素;Demethylnobi 2174-59-6 20mg 訂購(gòu)|咨詢

芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷;Api 578-74-5 10mg 訂購(gòu)|咨詢

芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷;Apige 29741-09-1 10mg 訂購(gòu)|咨詢

5-羥基-6,7-二甲氧基黃酮;5-Hy 740-33-0 10mg 訂購(gòu)|咨詢

5-羥基-7,8-二甲氧基黃酮;5-hy 3570-62-5 10mg 訂購(gòu)|咨詢

去氫荷包牡丹堿;Dehydrodicen  10mg 訂購(gòu)|咨詢

去氫吳茱萸堿;Dehydroevodia 67909-49-3 10mg 訂購(gòu)|咨詢

藍(lán)舌病病毒型RT-LAMP試劑盒乙醛脫氫酶家族3成員A1抗體 英文名稱：ALDH3A1 0.1ml

磷酸化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質(zhì)/α-晶體蛋白b鏈抗體 英文名稱：phospho-alpha B Crystallin (Ser59) 0.1ml

γ2肌動(dòng)蛋白抗體 英文名稱：ACTG2 0.2ml

gp130結(jié)合蛋白GAM抗體 英文名稱：AES 0.2ml

繆勒激素2型受體抗體 英文名稱：AMHR2 0.1ml

激活素受體2A抗體 英文名稱：ACTR2 0.2ml

激活素受體1A抗體 英文名稱：ACTR1 0.2ml

激活素受體2B抗體 英文名稱：Activin Receptor Type IIB 0.2ml

2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框88抗體 英文名稱：C2orf88  0.2ml

G蛋白偶聯(lián)受體ARHGEF18抗體 英文名稱：ARHGEF18 0.2ml

激活素受體1B抗體 英文名稱：Activin A Receptor Type IB 0.2ml