細胞簡介：

骨膜是覆蓋在骨質(zhì)表面的一層結(jié)締組織。骨膜通過夏皮式纖維錨定在骨質(zhì)上，充當外部肌肉組織和內(nèi)部骨質(zhì)的連接橋梁，這種結(jié)構(gòu)有助于維持骨膜的完整性。

骨膜由兩部分組成，外層疏松的纖維層與內(nèi)層致密的細胞層，纖維層中含有成纖維細胞、膠原纖維、彈力纖維及微管等。細胞層中多為骨膜源干細胞，這種干細胞與骨髓來源的間充質(zhì)干細胞類似，具有多向分化的潛能。

骨質(zhì)修復、重塑和更新與骨膜中的干細胞密切相關(guān)。在正常生理狀況下，骨膜組織發(fā)揮著維持骨質(zhì)更新及重塑的作用，其中的干細胞既可以通過膜內(nèi)成骨方式分化為成骨細胞，也可通過軟骨內(nèi)成骨方式分化為軟骨細胞。

細胞特性：

1）細胞來源于實驗動物正常關(guān)節(jié)骨膜組織。

2)細胞鑒定：CD90或CD73熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：成纖維樣細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠甘露聚糖結(jié)合凝集素關(guān)聯(lián)絲酸蛋白酶1(MASP1)檢測試劑盒 ，英文名： MASP1 ELISA Kit

Rat alpha glathione S ansferase (-GST) ELISA Kit 大鼠αS轉(zhuǎn)移酶(α-GST)檢測試劑盒

Rateosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit 大鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforE(Mouseesogen)ELISAKit小鼠雌激素

細胞培養(yǎng)污染性支原體屬(Mycoplasma)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20次

RatImmunoglobulinA,IgAELISAKit大鼠免疫球蛋白A(IgA)檢測試劑盒

ST6GAL1重組小鼠 ST6GAL1 / CD75 蛋白 (His 標簽) Protein

RAS癌基因家族成員RAB37(RAB37)重組蛋白 Recombinant RAB37, Member RAS Oncogene Family (RAB37)

CRELD1重組人 CRELD1 蛋白 (His 標簽) Protein

ALDH1A3 Protein Human 重組人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 標簽)

PDGFB Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 PDGFB / PDGF-BB 蛋白

乙酰基酶(DLAT)重組蛋白 Recombinant Dihydrolipoyl Transacetylase (DLAT)

ALDH1A3 Protein Human 重組人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 標簽)

IL13重組小鼠 IL13 / ALRH 蛋白 Protein

CD38 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 SCARB3 蛋白

NRN1L重組人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 蛋白  Protein

豬補體片斷3b(C3b)ELISA 試劑盒

Human Legionella aibody IgG (LP Ab-IgG) ELISA Kit 人軍團菌抗體IgG(LP Ab-IgG)檢測試劑盒

Porcinediamineoxidase,DAOELISAKit 豬氧化酶(DAO)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforALOX-5(Humanarachidonate5-lipoxygenase)ELISAKit人花生四烯酸5脂加氧酶

血液卵0脂乙酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)活性酶連續(xù)循環(huán)反應比色法定量檢測試劑盒20次

Mouseαmannosidase,αManaseELISAKit小鼠α甘露糖苷酶(αManase)檢測試劑盒

兔骨膜干細胞中文名稱   方法   規(guī)格

小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISAKit   ELISA. 

小鼠黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISAKit   ELISA. 

小鼠腦紅蛋白(NGB)ELISAKit   ELISA.