實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

腎間質(zhì)是指腎臟血管和腎小管間的區(qū)域，為疏松的結(jié)締組織構(gòu)成，由間質(zhì)細胞、網(wǎng)狀纖維、少量彈力纖維、成纖維細胞核巨噬細胞等組成。

細胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常腎組織。

2)細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代成纖維細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠IgG Fc片段(IgGFcγ)檢測試劑盒

Rat advanced glycation end products (AGEs) ELISA Kit 大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)檢測試劑盒

HumahromboxaneB2,TX-B2ELISAKit 人血栓素B2(TXB2)檢測試劑盒 進口分裝

HumanCollagenaseTypeII檢測試劑盒人膠原酶II(CollagenaseII)檢測試劑盒

組織ABL1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumaeceptorⅢfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅢELISAKitGFc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)檢測試劑盒

IL8重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 標(biāo)簽) Protein

Ⅹ(F10)重組蛋白 Recombinant Coagulation Factor X (F10)

EFNA4重組人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白  Protein

ALOX5AP Protein Human 重組人 ALOX5AP / FLAP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

Ⅹ(F10)重組蛋白 Recombinant Coagulation Factor X (F10)

ALOX5AP Protein Human 重組人 ALOX5AP / FLAP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IL8重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

EFNA4重組人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白  Protein

豬促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA 試劑盒

Human macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit 人巨噬細胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)檢測試劑盒

PorcineDexamethasone,DexELISAKit 豬(Dex)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlpha1Beta-GP(HumanAlpha1Betaglycoprotein)ELISAKit人α1β糖蛋白

血液0酸二酯酶3(PDE3)活性熒光定量檢測試劑盒10次

MouseαN-acetylglucosaminidase,αNAGELISAKit小鼠αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)檢測試劑盒

兔腎間質(zhì)成纖維細胞豬Ⅲ型膠原(ColⅢ)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

植物玉米素核苷(ZR)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

植物玉米素(Z)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。