細(xì)胞簡介：

毛囊的上皮是由表皮延伸而來，主要分為外根鞘和內(nèi)根鞘。其中，外根鞘相當(dāng)于表皮的基底層和棘細(xì)胞層，由數(shù)層不含色素的細(xì)胞組成。外根鞘細(xì)胞與表皮細(xì)胞相比具有更強(qiáng)的增殖活性。此外，有研究表明，胰島素與 EGF對(duì)外根鞘細(xì)胞的增殖具有明顯的促進(jìn)作用。

細(xì)胞特性：

1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常皮膚組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白-19((CK-19)熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 上皮 細(xì) 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠白介素31(IL-31)elisa檢測(cè)試劑盒

人醛固酮（ALD）elisa檢測(cè)試劑盒

酵母菌YNB培養(yǎng)基

魚球蛋白A(IgA)elisa分析檢測(cè)試劑盒

大鼠雙氫睪酮(DHT)elisa檢測(cè)試劑盒

冰凍切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）染色試劑盒

人β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠白三烯C4(LTC4)elisa分析檢測(cè)試劑盒

小鼠纖溶酶原激活劑抑制物（PAI-1）elisa檢測(cè)試劑盒

DNAJC11蛋白抗體 DNAJC11

D型-過氧化酶活化受體抗體 PPAR delta + beta

磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 phospho-CaMK2 alpha (Tyr230)

磷酸化酶激酶γ1 PHKG1

表皮細(xì)胞表面抗原1/Esa1抗體 Flotillin 2

叉頭蛋白S1抗體 FOXS1

腺苷酸活化蛋白激酶γ1抗體 AMPK gamma 1

鋅指蛋白142抗體 ZNF142

OTUD1蛋白抗體 OTUD1

PE-Cy5標(biāo)記人CD55單克隆抗體 human CD55/PE-Cy5

神經(jīng)母細(xì)胞瘤源性分泌蛋白抗體 C1orf76

神經(jīng)元核抗原抗體 NeuN

核糖核酸結(jié)合蛋白2抗體 PTBP2

黑色素瘤相關(guān)突變抗原1樣蛋白1抗體 MUM1L1

轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1 TAK1

自噬相關(guān)蛋白9B抗體 ATG9B

大鼠過氧化物酶體生物合成因子2(PEX2)elisa檢測(cè)試劑盒

植物2(VD2)elisa生化檢測(cè)試劑盒

VD2 ELISA Kit

人催產(chǎn)素受體(OXTR)elisa生化檢測(cè)試劑盒

兔外根鞘細(xì)胞HumanOXTRELISAKit