細(xì)胞簡介：

軟骨細(xì)胞存在于關(guān)節(jié)軟骨中，負(fù)責(zé)分泌 II型膠原和其它類型的膠原以及非膠原的細(xì)胞外基質(zhì)大分子。成軟骨細(xì)胞的增殖和分化與脊椎動(dòng)物骨架的發(fā)育有著密切的關(guān)系。軟骨細(xì)胞能分泌和響應(yīng)一系列的生長因子，包括IGF-1和IL1。體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞是研究軟骨修復(fù)和關(guān)節(jié)炎病理的有用模型。

細(xì)胞特性：

1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的椎體終板軟骨關(guān)節(jié)組織。

2）細(xì)胞鑒定：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)熒光染色為陽性。

3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5）細(xì)胞生長方式：長梭狀，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 軟骨 細(xì) 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠核呼吸因子1(F1)檢測試劑盒 ，英文名： F1 ELISA Kit

Rat 5 hydroxyyptamine (5-HT) ELISA Kit 大鼠5羥色胺(5-HT)檢測試劑盒

RatleukoieneE4,LT-E4ELISAKit 大鼠白三烯E4(LTE4)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforeNOS-3(HumanAlpha1-Acidglycoprotein)ELISAKit人內(nèi)皮型合成酶3

細(xì)胞0脂酶D2(PhospholipaseD2)水解活性比色法定量檢測試劑盒20次

RatLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit大鼠白三烯C4(LTC4)檢測試劑盒

LON PROTEASE重組大腸桿菌 Lon protease 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

TNF-alpha 壞死因子-α抗原 0.5mgTNF-alpha 壞死因子-α抗原

TNK2重組人 ACK1 / TNK2 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

AMY2B Protein Human 重組人 AMY2B 蛋白

NGF Protein Human 重組人 β-NGF / Beta-NGF 蛋白

TNF-alpha 壞死因子-α抗原 0.5mgTNF-alpha 壞死因子-α抗原

AMY2B Protein Human 重組人 AMY2B 蛋白

LON PROTEASE重組大腸桿菌 Lon protease 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

NGF Protein Human 重組人 β-NGF / Beta-NGF 蛋白

TNK2重組人 ACK1 / TNK2 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

豬干擾素γ(IFN-γ)ELISA 試劑盒

Human a disiegrin and metalloproteinase 10 (ADAM10) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶10(ADAM10)檢測試劑盒

PorcineEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 豬內(nèi)皮型合成酶(eNOS)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlpha2-PI(MouseAlpha2-plasmininhititor)ELISAKit小鼠α2纖溶酶抑制物

血液賴(lysine)含量熒光定量檢測試劑盒20次

Nudemousecyclooxygenase-2,COX-2ELISAKit裸鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)檢測試劑盒

兔椎體終板軟骨細(xì)胞豬白細(xì)胞間介素10   英文名稱：   Porcine Ierleukin 10   規(guī)格：      英文縮寫：   IL-10

豬白細(xì)胞間介素1β   英文名稱：   Porcine Ierleukin 1β   規(guī)格：      英文縮寫：   IL-1β

豬白細(xì)胞間介素 1   英文名稱：   Porcine Ierleukin 1   規(guī)格：      英文縮寫：   IL-1

豬白細(xì)胞間介素2   英文名稱：   Porcine Ierleukin 2   規(guī)格：      英文縮寫：   IL-2