肺表面活性物質相關蛋白CElisa試劑盒免疫測定標準化的難點在于蛋白的不均一性、基質效應、交叉反應以及需要測定接近測定方法下限的濃度等，所測定的免疫反應性通常是在糖基化、降解和復合形式上有差異的蛋白同種型的混合體。
基質效應
免疫測定的基質效應通常定義為干擾抗原和抗體間反應但與分析物本身無關的非特異
因素。基質效應與測定模式和抗體選擇有較大關系，因此，其對不同免疫測定的影響方式也有所不同。基質效應通常由蛋白、鹽、磷脂、補體、抗免疫球蛋白抗體（類風濕因子和人抗鼠抗體）、藥物和可能污染樣本的物質引起。這些效應可通過仔細的實驗設計來減少，例如使用一定亞型的高親和力抗體或抗體片段、降低樣本對總測定體積的比例、在測定緩沖液中加入免疫球蛋白、理想的溫育溫度和較長的溫育時間。免疫測定的校準物通常用類似于樣本的基質的緩沖液制備，基質可為無分析物的人血清、無免疫學交叉反應抗原的動物血清或蛋白含量類似于樣本的人工緩沖液等。因為血清的成分各有不同，每批血清基質的差異有可能會影響校準，因此以純蛋白溶液作為基質較容易保持一致，但對于結合至血清蛋白的激索來說，除了人血清外，其他基質不能使用。
血清和血漿中總蛋白和鹽的濃度相當穩定，但尿液中鹽濃度則變化較大，鹽濃度增加對抗原抗體間反應起一個抑制作用。如果樣本體積小于總反應體積的10%~15%，則蛋白的影響不明顯，但有時為提高測定的敏感性，常需一個較大的樣本體積。因此，要求參考方法具有低的測定下限，且樣本體積對總反應體積應小至足以排除大部分基質效應。
樣本中的免疫球蛋白可通過與測定中所使用的特異抗體發生反應而影響測定結果。如自身免疫病患者常有可與抗體反應的類風濕因子（RF）針對動物免疫球蛋白的嗜異性天然抗體相當普遍，但一般情況下其濃度和親和力較低。自身抗體和嗜異性天然抗體的存在通常會引起假陽性反應。這些干擾可通過加入足量的來自同一種系的免疫球蛋白而減小，也可在測定中使用抗體的Fab或（F‘ab）2片段替代完整抗體來減小干擾，但如果樣本含有針對試劑抗體的個體基因型（idiotype）抗體，則這種方法無效。這種情況下只有將免疫球蛋白從樣本中去除或使用一個依據另一個抗體的方法測定。
各種補體成分均能與抗體反應，從而肺表面活性物質相關蛋白CElisa試劑盒干擾試劑抗體結合抗原及與次級抗體反應的能力，在雙夾心測定中可引起假陽性，在競爭抑制試驗中引起假陽性。小鼠IgG2,和IgG2,免疫球蛋白亞對補體的效應尤為敏感。可通過加熱樣本或在反應緩沖液中加入螯合劑來排除補體的干擾，但加熱會影響很多的分析物，而螯合劑對諸如鍺螯合劑和酶等非放射性核索標記物有干擾，因此傾向于使用對補體效應不敏感的抗體或抗體片段建立測定方法。
有報道稱磷脂在類固醇測定中可干擾抗原的結合而引起結果的假增高，許多其他因子如血清分離膠中的成分、抗凝劑去垢劑、藥物、非酯化脂肪酸等對某些免疫測定也有干擾。
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