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      分子信標的原理、應用及其研究進展
      點擊次數:1292 更新時間:2017-07-14

      1、抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒引言
      在基因時代和蛋白質時代,人們迫切需要一種具有高靈敏度和高親和力的生物分子探針,用以進行定性和定量檢測。1996年Tyagi和Kramer首先建立了分子信標技術,很快這種技術就廣泛的應用于醫學、生物學、分子生物學、臨床醫學和化學等諸多領域。分子信標技術具有*的特異性,而且操作簡便、靈敏度高,特別是它可以進行實時定量檢測、甚至可以用于活體分析。在臨床診斷、基因檢測等領域,分子信標也越來越顯示出它的優勢。近年來,人們對分子信標的結構作了諸多改進,發展出很多具有更多特性的新型分子信標。隨著分子信標的發展,該技術也必將在更多領域中發揮出它的優勢。
      2 分子信標的原理
      分子信標是一種熒光標記的寡核苷酸鏈,一般含有25~35個核苷酸。在結構上,抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒分子信標大體上可以分為三部分:(1)、環狀區:一般由15~30個核苷酸組成,可以與靶分子特異結合;(2)、莖干區:一般由5~8個堿基對組成,在分子信標與靶分子結合過程中可發生可逆性解離。(3)、熒光基團和淬滅基團:熒光基團一般連接在5ˊ端;淬滅基團一般連接在3ˊ端,常用4-(4-二甲基氨基偶氮苯基)苯甲酸(DABCYL)作為淬滅基團。根據Foerster理論,中心熒光能量轉移效率與兩者距離的6次方成反比。所以只有熒光基團與淬滅基團之間達到一定的距離時才會產生熒光。
      自由狀態時,分子信標呈發卡式結構,從而熒光基團和淬滅基團相距較近(約7~10nm)。此時發生熒光共振能量轉移,使熒光基團發出的熒光被淬滅基團吸收并以熱的形式散發,熒光幾乎*被淬滅,熒光本底極低。當分子信標與靶分子結合時,熒光基團和淬滅基團之間的距離加大,從而,分子信標的熒光幾乎恢復。而且所檢測到的熒光強度與溶液中靶標量成正比。
      分子信標的原理、應用及其研究進展
      3、影響分子信標的主要因素
      分子信標中,熒光基團和淬滅基團之間的距離是影響分子信標的zui主要因素。根據Foerster理論,熒光基團與淬滅基團之間的距離直接影響熒光的強度。
      另外,溫度也是影響分子信標的一個重要因素。在較低溫度下,分子信標才可以保持發卡結構。在較高溫度下,分子信標將無法保持其發卡結構,甚至使其伸展為隨機線狀,造成熒光基團和淬滅基團分離,從而發出熒光,出現假陽性結果。有文獻表明,其熔鏈溫度取決于莖干區的長度、G-C含量和緩沖液的離子強度。
      Bonnet等研究溫度對分子信標影響時發現,體系的熒光強度呈現為一個先減弱后增強的過程。就此,Bonnet等做出如下解釋:
      分子信標的原理、應用及其研究進展
      在較低溫度下,分子信標與靶標結合呈S1狀態,發出熒光。隨著溫度升高,分子信標與靶標分離,分子信標重新恢復為發卡式結構即S2狀態,從而熒光強度減弱。溫度持續增高,將導致分子信標熔鏈即S3狀態,熒光基團與淬滅基團分離,導致熒光恢復。
      環境pH值也是影響分子信標的一個因素。pH值過高,分子信標的發卡結構可能被破壞,出現假陽性結果。此外,抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒分子信標的純度,也將對分子信標產生影響。

       

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