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      牛表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒操作步驟
      點(diǎn)擊次數(shù):958 更新時間:2016-09-01

      牛表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒操作步驟
      1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
      600pg/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
      300pg/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
      150pg/ml3號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
      75pg/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
      37.5pg/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
      2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
      3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
      4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
      5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
      6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。
      7.溫育:操作同3。
      8.洗滌:操作同5。
      9.顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
      10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
      11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)

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