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      關(guān)于ELISA試劑盒測(cè)抗原的競(jìng)爭(zhēng)法
      點(diǎn)擊次數(shù):1127 更新時(shí)間:2016-11-03

      關(guān)于ELISA試劑盒測(cè)抗原的競(jìng)爭(zhēng)法 

       

      ELISA試劑盒當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時(shí),可用此法檢測(cè)特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,因此陽(yáng)性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會(huì)有干擾物質(zhì),直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì),然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合反應(yīng)。競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體有多種模式,可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,抗HBc ELISA一般采用此法。另一種模式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,洗滌后再加入酶標(biāo)抗體,與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)。抗HBe的檢測(cè)一般采用此法。
      實(shí)驗(yàn)步驟 
      1.  以稀釋液將待檢標(biāo)本做適當(dāng)稀釋(預(yù)試中確定)加入包被有已知抗原的酶標(biāo)板中(50ul/孔),加封口膠帶于37℃作用30min。
      2.  棄反應(yīng)液,以沖洗液連續(xù)洗板5次并于吸水紙上拍干。
      3.  加入酶標(biāo)抗體(濃度在預(yù)試中確定)。加封口膠帶后于37℃作用30min。
      4.  重復(fù)第2步。
      5.  加底物(濃度在預(yù)試中確定),加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min,其間不時(shí)觀察,顯色滿意后加終止液50ul/孔。
      6.  于酶標(biāo)儀測(cè)定OD值,OPD用492nm測(cè)定,TMB用450nm測(cè)定。
       

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