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      植物組織RNA提取的技巧
      點擊次數:1118 更新時間:2016-08-26

      植物組織RNA提取的技巧
      從植物組織中提取RNA 是進行植物分子生物學方面研究的必要前提。要進行Northern雜交分析,純化mRNA 以用于體外翻譯或建立cDNA文庫,RT-PCR及差示分析等分子生物學研究,都需要高質量的RNA 。因此,從植物組織中提取純度高、完整性好的RNA 是順利進行上述研究的關鍵所在。
      從文獻報道上看,有許多植物就是由于未能有效地分離純化其組織中的RNA ,而阻礙了其分子生物學方面研究的進展。一般認為在這些植物組織中,或富含酚類化合物,或富含多糖,或含有某些尚無法確定的次級代謝產物,或RNase的活性較高。在完整的細胞內這些物質在空間上與核酸是分離的,但當組織被研磨,細胞破碎后,這些物質就會與RNA 相互作用。酚類化合物被氧化后會與RNA 不可逆地結合,導致RNA 活性喪失及在用、抽提時RNA 的丟失,或形成不溶性復合物;而多糖會形成難溶的膠狀物,與RNA 共沉淀下來;萜類化合物和RNase會分別造成RNA 的化學降解和酶解。對于這些植物材料,用常規的RNA 提取方法(如胍法、法和十六烷基*基溴化胺法等)難以提取出其RNA 。如Lбpez-Gбmez等在用常規的方法提取芒果果實的RNA 時未能成功,他們的結果分為三種情況:提出的RNA 已被降解;RNA 的得率很低;得到的RNA 不能進行體外翻譯。他們認為在果實成熟時各種酶的活性增強,其中也包含RNase,不溶性的淀粉轉化為可溶性的多糖,芒果果實細胞壁中特殊的成份,以及果實中高含量的多酚化合物都是干擾RNA 提取的因素。Tesniere等在用法和胍法提取葡萄果實的RNA 時,發現RNA 與某種未知化合物凝聚成不溶性的復合物,并且這種未知化合物在230nm和270nm處有強的光吸收,從而干擾了RNA 紫外吸收的測定。因此能否有效地去除多糖、酚類化合物、RNase和干擾RNA 提取的其它代謝產物是提取高質量植物RNA 成敗的關鍵。本文根據文獻綜述了解決上述植物RNA 提取過程中難點的相應對策。

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