霉菌是發酵工業產品的重要菌種，特別是抗生素和酶制劑。霉菌雜交育種是利用霉菌的準性生殖過程中的基因重組和分離現象，將不同菌株的優良特性集合到一個新菌株中去，從中篩選出具有高產和優良特性的新菌株。ELISA試劑盒

1.異核體的形成

(1)直接親本的選擇 用來進行雜交的兩個野生型菌株叫原始親本，它們在基本培養基上能夠形成豐富的孢子，并且具有較強的重組性能。原始親本經過誘變以后得到各種突變型菌株，假設這種菌株是用來作為形成異核體的親本，就叫直接親本。直接親本形態上必須穩定，其原始菌株還要攜帶明顯營養標記和輔助標記等生理特性，如營養缺陷型、耐藥性、產量特性等，目前應用普遍的是營養缺陷型菌株。

(2)異核體的形成異核體是由兩種不同基因型的菌絲細胞融合產生的，只有具有交醞型的菌株才能形成異核體。由兩個含有不同營養缺陷型標記的直接親本經細胞融合形成的異核體由于已經進行了質配，因此異核體在生長過程中具有了親本細胞各自缺陷的營養生長能力，這就是營養互補作用，使得異核體能在基本培養基上生長。異核體形成的過程是要將兩個直接親本菌株的分生孢子或菌絲體進行混合接種、培養，使兩個配對菌株的細胞彼此接觸，進而促進細胞壁融合和細胞質交流，產生異核體。主要方法有*培養基混合法、基本培養基銜接法和有限培養基培養法。

①*培養基混合法將配對菌株的孢子混合接種在液體*培養基中培養，待長出幼嫩菌絲后，用生理鹽水洗滌離心數次，除去黏附的培養基，把菌絲撕碎，并涂布于基本培養基平板上培養，直至長出異核體的菌絲叢，挑取其上的孢子移到基本培養基舒面上保存。此法特別適合于兩個直接親本的分生孢子不易融合的情況。ELISA試劑盒

    另一種*培養基混合法是把兩個直接親本的分生孢子混合接種于*培養基斜面上，培養5～8天后，形成為數很少的異核體，進一步純化分離，可以獲得異核體的單個菌落，移接到基本培養基上保存。

②基本培養基銜接法取兩個親本菌株新鮮斜面上的分生孢子，用生理鹽水洗滌數次，制成高濃度的孢子懸浮液，分別從上至下和從下至上涂接到基本培養斜面上，接種長度約為斜面的2／3，而兩菌株接種的銜接部分約為1／3。培養后，銜接部分長出異核體菌絲叢。進一步考證、純化，移人斜面保存。該法獲得異核體頻率很高。

③有限培養基培養法有限培養基(LM)是由*培養基和基本培養基以1：9比例組成。有限培養基培養法可分為液體靜止培養法和固體平板培養法兩種。液體靜止法是在液體有限培養基中接入兩個配對菌株的分生孢子，培養l～2天后，將長出的幼嫩菌絲撕碎，涂布于基本培養基上，培養6～8天，將長出的異核體菌絲叢移人斜面保存。固體平板培養法是將兩個配對菌株的分生孢子等量混合制成孢子懸浮液，涂布到有限培養基瓊脂平板上，培養6～8天后，在兩個親本菌落間形成異核體菌絲叢。

(3)異核體的檢出 在進行異核體檢出時尤其要排除由親本互養產生的菌落。所謂互養是指，有時兩個不同營養缺陷的親本菌株在基本培養基上生長時．由于彼此十分靠近，盡管沒有發生細胞融合，但產生的代謝產物通過培養基的滲透可以互為對方所利用，彌補各自的營養缺陷，從而可以在基本培養基上生長。由于發生互養現象的親本菌株間并沒有發生遺傳物質的轉移，因而可以在接下來的篩選中排除，篩選出真正的異核體。主要方法有：①把以上異核體菌絲叢中的菌絲，單*條一條地挑取，置于基本培養基上培養，凡是能重新形成菌落的，即為異核體，這種方法可以排除互養菌株。②把異核體菌落上的大量分生孢子涂布在基本培養基上．如能形成為數不多的雜合二倍體菌落，則為真正的異核體，否則就不是異核體；或者將異核體菌落培養到一定時間，在*的異核體孢子顏色的菌落上，出現類似野生型孢子顏色角變或斑變的雜臺二倍體，說明菌落確是由異核體形成的。ELISA試劑盒

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