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      莢膜阿耶羅菌探針法熒光定量PCR試劑盒實驗操作步驟
      點擊次數:619 更新時間:2022-04-12

      莢膜阿耶羅菌探針法熒光定量PCR試劑盒實驗操作:

      1. 模板制備(樣本制備區)

      建議使用配套水生動物病害基因組 DNA/RNA 提取試劑盒系列產品,具體過程詳見產品說明書。

      2.添加模板(模板添加區,放置于冰盒中進行)

      請于-20℃條件下保存,有效期 12 個月

      取出所需測試數的已含有反應液 A-TSV-I 的 PCR 管,將試劑*解凍,離心 30 秒,在管蓋上標記管名(陰性對照管 NG、樣品 XX、陽性對照管 PG)。打開管蓋向各管管底分別加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I,蓋上陰性對照管管蓋,其他各管分別沿管壁加入 2μL 模板,順序為待測樣品模板、PG-TSV-I,依次蓋好各管管蓋,離心 30 秒,立即進行擴增反應。

      3. 擴增反應(擴增及產物分析區)

      ①恒溫儀器 63℃條件下反應 60 min。待儀器升溫至 63℃后,新建程序,設置實驗名稱及反應時間,將步驟 2中離心后的 PCR 反應管放入恒溫熒光分子檢測儀,點擊開始檢測。

      ②若使用熒光定量 PCR 儀,則熒光基團選擇 FAM,淬滅基團選擇 None,將 63℃ 15 s,63℃ 45 s 作為一個循環,于 63℃ 45 s 處收集熒光信號,60 個循環。




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